Caracterización de YonN

Abstract

Ante la crisis global de salud pública provocada por la resistencia a los antibióticos, los bacteriófagos han surgido como una alternativa terapéutica prometedora. Sin embargo, su aplicación eficaz requiere un conocimiento profundo de los mecanismos moleculares que regulan su ciclo de vida, incluyendo novedosos sistemas de comunicación viral como Arbitrium en el fago SPβ. En el presente trabajo se ha abordado la caracterización estructural, bioquímica y funcional de la proteína YonN del fago SPβ, una proteína de tipo HU-like cuya función en la organización del ADN viral no había sido previamente descrita en detalle. Para ello, se integraron aproximaciones de modelado estructural mediante AlphaFold, técnicas de clonación molecular, expresión heteróloga en Escherichia coli y purificación proteica mediante cromatografía de afinidad (IMAC) y exclusión molecular (FPLC), junto con el análisis de la interacción proteína–ADN mediante ensayos de desplazamiento electroforético (EMSA) bajo distintas condiciones topológicas y de concentración. Los resultados obtenidos muestran que YonN presenta una elevada afinidad por el ADN, evidenciada por la co-purificación de ADN endógeno del hospedador durante los procesos de purificación, lo que sugiere una interacción estable y persistente con material genético. Los ensayos EMSA indican que YonN es capaz de interaccionar con distintas conformaciones de ADN sin una preferencia marcada por la topología, generando desplazamientos en todos los sustratos analizados, aunque acompañados de patrones de unión difusos y formación de complejos heterogéneos. En comparación con su homólogo bacteriano HU-like HBsu, YonN presenta un comportamiento menos definido y dependiente de la concentración en términos de formación de complejos discretos. En conjunto, estos resultados permiten establecer que YonN es una proteína con una fuerte capacidad de interacción con el ADN, aunque con un comportamiento de unión complejo y heterogéneo, posiblemente influido por la presencia de ADN co-purificado y por la naturaleza intrínseca de sus interacciones. Este trabajo amplía el conocimiento sobre proteínas HU-like codificadas por fagos y contribuye a la comprensión de los mecanismos de organización del genoma viral, aportando información relevante para el estudio de sistemas fágicos y su potencial aplicación en el desarrollo de estrategias biotecnológicas frente a infecciones bacterianas resistentes.